Абстракт: Представленный проект направлен на создания прибора диагностики в месте оказания медицинской помощи (ДМОП), использующий метод изотермической ПЦР для накопления вещества и ДНК-наносенсоры для узнавания фрагмента и визуализации результата.
Задачами этого проекта является оптимизация ранее созданной системы выделения, амплификации и детекции нуклеиновых кислот в прототипе настольной биолаборатории, в том числе оптимизация выделения на случай выявления у пациента штаммов организмов с устойчивостью клеточной стенки к детергентам, оптимизация этапов накопления и визуализации в целью увеличения однозначности определения окраски и увеличения чувствительности и сокращения расхода реагентов, оптимизация времени экспозиции менее 2,5 часов, получение продуцента Т7-РНК полимеразы и протокола ее очистки и адаптация всей системы к самостоятельно полученным ферментам.
Результаты: В результате работы была выполнена оптимизации работы устройства, способного проводить анализ 16 патогенов в образцах спинномозговой жидкости, а именно:
– Оптимизированы методики выделения нуклеиновых кислот из клинических образцов с учетом их вариативности устойчивости к детергентам
– Чувствительность прибора уменьшена до менее 100 геномных эквивалентов
–Оптимизирована реакция амплификации с Т7-РНК полимеразой собственного производства
– Время совокупности реакций диагностического устройства сокращено до 2,5 часов
